Requisitos para el registro de esporicidas

Los esporicidas se utilizan en superficies y objetos inorgánicos duros y no porosos para matar esporas. Las esporas de las bacterias se consideran la forma de vida microbiana más difícil de destruir.

La Agencia de Protección Ambiental de EE. UU. (EPA) obliga a disponer de datos de eficacia bajo condiciones de prueba controladas con el fin de poder hacer reclamos esporicidas en productos antimicrobianos. Para crear datos sobre la eficacia esporicida, se debe seguir el Método oficial de la AOAC 966.04 para la actividad esporicida de los productos desinfectantes. Añadir un reclamo esporicida para superficies duras y no porosas a un producto líquido implica exponer a 60 portadores de penicilindros de acero inoxidable inoculados con esporas de Bacillus subtilis (ATCC 19659) y Clostridium sporogenes (ATCC 3584) al esporicida. Se deben poner a prueba tres remesas del producto en LCL de A.I.(s) enumerados en CSF. Además de este requisito, un esporicida también debe demostrar ausencia de crecimiento (matar completamente) en 60 portadores (30 portadores por organismo para una remesa) en una prueba de verificación. Las pruebas de verificación se deben llevar a cabo en un laboratorio independiente o con un nuevo equipo de personal.

En Europa, los fabricantes realizan pruebas de suspensión siguiendo el método EN13704 para reclamar actividad esporicida. Para poder poner un reclamo esporicida, se debe lograr una reducción de >3 log de Bacillus subtilis (ATCC 6633) con un tiempo de contacto menos o igual a 60 minutos.

La versión más actual de EN13704 en 2018 se publicó con algunas modificaciones respecto a la versión anterior publicada en 2002, entre los que se incluyen cambios en la preparación de las esporas y los controles de sensibilidad de los organismos sometidos a prueba. 

La preparación de las esporas de EN13704 requiere que un 80% de las células vegetativas esporulen mientras que AOAC 966.04 requiere que el 95% de las células vegetativas esporulen.  Tras la preparación de la suspensión de esporas, EN13704 requiere realizar una prueba de sensibilidad para comprobar el desempeño de la suspensión de esporas contra dos biocidas estándar, Glutaraldehído y ácido peracético. Las pruebas utilizan dos concentraciones por biocida, alta y baja. Para cumplir con los criterios de EN13704, la suspensión de esporas debe mostrar superviencia (<reducción de <3 log) en la baja concentración y eliminación (>reducción de >3 log) en la alta concentración. AOAC 966.04 requiere realizar una prueba de resistencia al ácido clorhídrico para comprobar el desempeño de la suspensión de esporas según el estándar 2.5 M HCl. Para cumplir con los criterios de AOAC 966.04, las esporas deben resistir 2.5 M HCl durante un periodo igual o superior a 2 minutos.

El uso de suspensiones de esporas en la prueba esporicida de AOAC y la cuidadosa preparación de las suspensiones de esporas en EN13704 garantiza que los productos que reclaman ser esporicidas son puestos a prueba de manera adecuada durante las pruebas de eficacia.

Eficacia esporicida de los compuestos cuaternarios de amonio

Los compuestos cuaternarios de amonio son agentes catiónicos de superficie y tienen una amplia gama de actividades contra microorganismos, aunque son más efectivos contra las bacterias Gram-positiva a concentraciones bajas que a las bacterias Gram-negativa. Son mucho menos efectivas contra los formadores de esporas³. 

Muchos biocidas son bactericidas o bacteristáticos a bajas concentraciones de bacterias no esporulantes, incluidas las células vegetativas de especies de Bacillus y Clostridium. Las altas concentraciones de algunos biocidas pueden lograr una alta eficacia esporicida (por ejemplo, glutaraldehído y CRA). 

Por el contrario, incluso altas concentraciones de alcohol, fenólicos, compuestos cuaternarios de amonio y chlorhexidina no tienen efecto esporicida (aunque es posible lograr eficacia esporicida con la chlorhexidina si se utiliza altas temperaturas)⁴. 

Los compuestos cuaternarios de amonio son esporostáticos; inhiben el crecimiento de las esporas (el desarrollo de una célula vegetativa de una espora germinada) pero no los procesos de germinación en sí (el desarrollo de un estado de inactividad a un estado de actividad metabólica)².

Los compuestos cuaternarios de amonio pueden mostrar alguna eficacia contra las células vegetativas de especies de Bacillus y Clostridium, aunque los compuestos cuaternarios de amonio no son capaces de destruir las esporas como tal.

Los reclamos esporicidas requieren la realización de pruebas contra esporas, no células vegetativas. Para mantener el control en un entorno de ambiente aséptico, es necesario emplear agentes biocidas con actividad esporicida contra las propias esporas.

[1] McDonnell, G, Russell AD. Antiseptic and Disinfectant: Activity, Action and Resistance. Clin Micrbiol. 1999 Jan; 12(1):147-179.
[2] Russell AD. Bacterial spores and chemical sporicidal agents. Clin Microbiol Rev. 1990 Apr; 3(2):99-119.
[3] Sandle, T. The CDC Handbook: A Guide to Cleaning & Disinfecting Cleanrooms. 1–27.
[4] Shaker L A, Russell A D, Furr J R. Aspects of the action of chlorhexidine on bacterial spores. Int J Pharm. 1986;34:51-56.